HPLC法检测人参皂苷Rg1和Rb1评价血栓通注射液放置稳定性的研究

发表时间:2018-06-09 ? 来源:《系统医学》2017年6期 ? 作者:韩爱玲
[导读]:通过HPLC法检测血栓通注射液中的人参皂苷Rg1和Rb1可以评价其放置稳定性。
(新疆阿勒泰地区食品药品检验所,新疆 阿勒泰?836500)

摘要目的通过HPLC法检测人参皂苷Rg1和Rb1评价血栓通注射液的放置稳定性。方法建立HPLC检测条件:C18柱,乙腈和水为流动,检测波长203 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温37℃。样品分为A、B两组,A组为生产一个月内的血栓通注射液,B组为放置2年的血栓通注射液。结果:A组人参皂苷Rg1在0.141-2.311μg范围内线性关系良好,R=0.999,人参皂苷Rb1在0.145-2.991μg范围内线性关系良好,R=0.998,平均回收率分别为99.4%和94.7%。B组人参皂苷Rg1在0.121-2.421μg范围内线性关系良好,R?=0.999;人参皂苷Rb1在0.136-2.731μg范围内线性关系良好,R=0.996,平均回收率分别为98.7%和95.6%。两组的精密度、稳定性、重复性RSD均小于2%;A组和B组血栓通注射液共5批样,两组之间人参皂苷Rg1和Rb1含量无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论通过HPLC法检测血栓通注射液中的人参皂苷Rg1和Rb1可以评价其放置稳定性。
关键词?HPLC;血栓通注射液;人参皂苷;稳定性
血栓通注射液是国家火炬计划复方血栓通胶囊的延续,其主要用于急性缺血性脑血管疾病的治疗[1]。该制剂中三七为君药,含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1等皂苷。目前,其法定质量标准采用HPLC测定其中5个皂苷类成分的含量[2]。血栓通注射液在放置储存过程中是否发生的含量的变化,将很大程度上影响其安全性和有效性,本研究将采用HPLC法,以人参皂苷Rg1和Rb1为指标,研究其在放置过程的含量变化,进而评价血栓通注射液的稳定性。?
1 仪器与试药
高效液相色谱仪:Agilent 1260(美国Agilent公司)。对照品:人参皂苷Rg1(批号110703-201027)和人参皂苷Rb1(批号110704-200420)由中国食品药品检定研究院提供,样品为市售品。
2 实验方法
2.1对照品和供试品的制备
???精密称取三七总皂苷对照品63.36 mg,加甲醇适量使溶解,并用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。血栓通注射液分为A、B两组。取每一组样品适量,混匀,精密量取1mL,置10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀即得。
2.2?色谱条件
HPLC色谱柱:Phenomenex Luna C18;流动相:乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0-45min,20% A;45-65 min,20%A→34% A;65-85 min,34% A;85-86 min,34%A→90% A;86-96 min,90% A),进样量:10μL,检测波长:203nm,流速:1 mL·min-1,。
2.3?方法学考察
2.3.1 线性关系考察
精密称取三七总皂苷对照品50.10 mg,置5 mL量瓶中,加甲醇适量使溶解,稀释摇匀,作为对照品储备液。精密量取对照品储备液适量,稀释成系列溶液,取1μL注入液相色谱仪测定,以对照品进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线。
2.3.2 重复性试验
取各组同一批样品,精密量取0.5、1、1.5 mL,各取3份,分别置10mL量瓶中,加甲醇至刻度,进样液相色谱仪测定。
2.3.3 准确度试验
精密量取已知含量的样品0.5mL,置10mL量瓶中,分别加入人参皂苷Rg1对照品溶液、人参皂苷Rb1对照品溶液各1mL,再加甲醇至刻度,进样液相色谱仪测定,计算回收率。
2.3.4稳定性试验
取同一供试品溶液,分别于0、2、4、8、16、32 h,进样液相色谱仪测定,评价实验的短期稳定性。
2.5 统计学方法
采用SPSS20.0软件进行,计量资料采用t检验,P<0.05表示差异有统计学意义。
3 结果
3.1 线性关系
????由表1所示,两组样品中人参皂苷Rg1和Rb1在各自的线性范围内线性关系良好,R均>0.99。
表1 ?两组样品的标准曲线及定量限
分组 待测成分 回归方程 R 线性范围(μg) 定量限(μg)
A组 人参皂苷Rg1 Y=7.563×105X+5.673×103 0.999 0.141-2.311 6.3
人参皂苷Rb1 Y=5.546×105X+2.312×103 0.998 0.145-2.991 3.3
B组 人参皂苷Rg1 Y=7.236×105X+5.248×103 0.999 0.121-2.421 6.1
人参皂苷Rb1 Y=5.309×105X+2.452×103 0.996 0.136-2.731 2.9
3.2 重复性
A组人参皂苷Rg1和Rb1的RSD分别为1.1%、1.3%;B组人参皂苷Rg1和Rb1的RSD分别为1.3%、1.5%,表明本方法重复性良好。
3.3 准确度
????A组人参皂苷Rg1和Rb1的平均回收率分别为99.4%和94.7%;B组人参皂苷Rg1和Rb1的平均回收率分别为98.7%和95.6%,表明本方法回收率良好。
3.4 稳定性
A组人参皂苷Rg1和Rb1?RSD分别为0.52%和0.71%;B组人参皂苷Rg1和Rb1?RSD分别为0.65%和0.72%。表明供试品溶液在室温下放置,至少32 h内稳定。
3.5 两组样品含量的对比
由表2所示,A、B组血栓通注射液人参皂苷Rg1和Rb1含量无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。
表2 两组样品中人参皂苷Rg1和Rb1测定结果(mg·mL-1
分组 待测成分 第1批 第2批 第3批 第4批 第5批
A组 人参皂苷Rg1 13.2 13.6 11.4 12.9 10.8
人参皂苷Rb1 11.2 10.4 12.5 13.0 10.2
B组 人参皂苷Rg1 11.3 12.4 14.5 11.4 13.2
人参皂苷Rb1 10.3 9.4 13.4 12.4 10.1
4 讨论
血栓通注射液主要成分为三七总皂苷提取物,其分离难点主要为人参皂苷Rg1与Re的分离及人参皂苷Rb1与相邻杂质峰的分离[3]。本实验针对血栓通注射液在放置的过程中成分和含量的变化,以人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1为质量控制指标,建立了HPLC的测定方法,并进行方法学验证,结果表明本方法简便,专属性强,准确,重复性良好,可用于该制剂的质量控制。血栓通注射液在我单位储存条件下,放置2年的时间,然后检测其稳定性,结果显示血栓通注射液在有效期2年内相当稳定,其主要质控成分人参皂苷Rg1和Rb1无显着的变化。以上结果提示血栓通注射液在我单位储存条件下,放置2年的时间并没有发生变化。
参考文献
[1] 罗先才. 冠心宁注射液联合血栓通注射液治疗不稳定型心绞痛[J]. 中国实验方剂学杂志, 2013, 19(4): 303-305.
[2] 王常顺, 刘永利, 王晓蕾, 等. UPLC, HPLC测定血栓通注射液中个皂苷类成分含量的比较研究[J]. 药物分析杂志, 2013, 33(9): 1617-1620.
[3] 成彦, 陈伟. HPLC法同时测定复方血栓通胶囊中5种皂苷类成分[J]. 安徽医药, 2015, 19(7): 1264-1267.
?
?
?
投稿 打印文章 留言编辑 收藏文章 推荐图书 返回栏目 返回首页

??期刊推荐
1/1